色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分，在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件，對(duì)高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，還能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

       一、性能測(cè)試

       新色譜柱使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考依據(jù) (柱性能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異有所不同，在測(cè)試中需保證方法一致性）。

       二、流動(dòng)相的配制

       液相色譜是通過(guò)樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

       流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）。

       流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

       流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)既能得到好的分離效果，同時(shí)又降低柱壓，延長(zhǎng)柱子的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。

       流動(dòng)相的物化性質(zhì)與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。

       流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

       流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣，除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體。

       三、新色譜柱使用前沖洗步驟

       1、首先查看色譜柱的說(shuō)明書，注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、最大耐受柱壓、及最高使用溫度等信息。

       2、如分析使用的流動(dòng)相與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存的溶劑混溶，可以直接使用流動(dòng)相參照色譜柱說(shuō)明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動(dòng)相與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存的溶劑不混溶，請(qǐng)選擇與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存溶劑和流動(dòng)相都混溶的溶劑，作為置換溶劑，逐步置換到分析使用的流動(dòng)相。每次置換均應(yīng)沖洗色譜柱20倍柱體積以上。

       四、日常使用注意事項(xiàng)

       1、請(qǐng)使用HPLC級(jí)別以上的試劑作為流動(dòng)相。

       2、流動(dòng)相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過(guò)。

       3、流動(dòng)相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。

       4、注意流動(dòng)相的流動(dòng)方向要與色譜柱標(biāo)識(shí)的方向一致。

       5、容易滋生微生物的流動(dòng)相不要存放過(guò)久，要及時(shí)換新，以免微生物滋生污染色譜柱。

       6、色譜柱分析結(jié)束后要及時(shí)徹底沖洗。

       7、長(zhǎng)時(shí)間不用的色譜柱要將流動(dòng)相置換為色譜柱保存的溶劑，并兩端用堵頭封死保存。

       8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。

       五、流動(dòng)相流速的選擇

       因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不用的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對(duì)于內(nèi)徑4.0mm柱，流速0.8mL/min為最佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加有機(jī)試劑甲醇或乙腈的含量）。

       液相色譜柱在色譜分析中起著至關(guān)重要的角色，是樣品分離的核心，正確使用色譜柱才能達(dá)到更好的理想的分離效果，提高色譜柱的使用壽命。