睿科：金銀花中多種禁用農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測(cè)定解決方案金銀花是我國傳統(tǒng)的藥食兩用中藥材之一，具有清熱解毒、疏風(fēng)散熱的功效，應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，市場需求量大。金銀花在種植過程中易染病蟲害，化學(xué)農(nóng)藥是其防治的最主要手段。因此金銀花的農(nóng)藥殘留問題也越發(fā)引起人們的關(guān)注。由于金銀花中含有揮發(fā)油、綠原酸、色素等成分，提取液不宜直接上機(jī)測(cè)試，需要經(jīng)過一定的凈化。
本文參照2020版《中國藥典》2341通則農(nóng)藥殘留量測(cè)定法新增第五法《藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測(cè)定法》中的固相萃取法，使用乙腈對(duì)金銀花試樣進(jìn)行均質(zhì)提取，經(jīng)鹽析和離心后，GC-MS/MS組化合物采用GCB/NH2柱凈化，LC-MS/MS組化合物采用HLB柱凈化，最后上機(jī)檢測(cè)。
本方法采用�？艫H-30均質(zhì)器進(jìn)行批量提取，提取液經(jīng)MPE高通量真空平行濃縮儀進(jìn)行濃縮，然后用Fotector Plus全自動(dòng)固相萃取儀對(duì)提取液進(jìn)行凈化，最后再用MPE高通量真空平行濃縮儀對(duì)洗脫液進(jìn)行濃縮，實(shí)現(xiàn)了金銀花前處理過程全流程自動(dòng)化。在40 ug/kg的加標(biāo)水平下GC-MS/MS法中33種化合物的回收率在71.5-118.4%之間，RSD值小于10%；在20 ug/kg的加標(biāo)水平下LC-MS/MS法中30種化合物的回收率在72.1-120.5%之間，RSD值小于10%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。
儀器
Raykol AH-30全自動(dòng)均質(zhì)器
Raykol MPE-16高通量真空平行濃縮儀
Raykol Fotector Plus 高通量全自動(dòng)固相萃取儀
Agilent 1290+6470高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀
Agilent 8890+7000D氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀
試劑
乙腈：HPLC級(jí)，甲苯：HPLC級(jí)
GC-MS/MS法33種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：40 μg/mL
LC-MS/MS法30種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：20 μg/mL
GC-MS/MS法內(nèi)標(biāo)使用液：磷酸三苯酯 0.1 μg/mL
GCB/NH2柱（500 mg/6 mL）
HLB柱（200 mg/6 mL）
樣品前處理
1 準(zhǔn)確稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于100 mL離心管中，加入1 g氯化鈉后立即搖散，加入50 mL乙腈
2 用Raykol AH-30全自動(dòng)均質(zhì)器在12000 r/min的攪拌速度下均質(zhì)2 min，轉(zhuǎn)速4000 r/min下離心5 min
3 將上清液倒入濃縮杯中，殘?jiān)偌尤?0 mL乙腈，繼續(xù)均質(zhì)1 min，離心5 min
4 合并兩次提取液，在Raykol MPE-16高通量真空平行濃縮儀中濃縮至3~5 mL
5 放冷的樣液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈多次潤洗濃縮杯并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最終用乙腈定容至刻度
6 GC-MS/MS法：量取上述溶液 2mL至15mL上樣管中，以石墨化碳氨基復(fù)合固相萃取小柱（500 mg，6ml）為凈化柱，先用10 mL乙腈-甲苯（3:1）活化小柱，棄去流出液，之后以1 mL/min的速度上樣，再用2×3 mL的乙腈-甲苯（3:1）清洗樣品瓶并過柱，最后用14 mL的乙腈-甲苯（3:1）洗脫，收集以上流出液，用MPE將洗脫液濃縮至近干，用乙腈轉(zhuǎn)移并稀釋至2 mL，混勻。精確移取1 mL上述定容液，精密加入0.3 mL磷酸三苯酯內(nèi)標(biāo)溶液，過0.22 μm濾膜后上氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。
7 LC-MS/MS法：量取直接提取法制備的溶液3mL，通過HLB柱凈化，收集全部流出液，混勻。精確移取1 mL上述凈化液，精密加入0.3 mL水后過0.22 μm濾膜，上高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定
本解決方案操作方便，提取、凈化和濃縮效率高、回收率好。AH-30全自動(dòng)均質(zhì)器可自動(dòng)進(jìn)行中藥樣品的均質(zhì)，且具備刀頭清洗，無需人員值守，避免有機(jī)溶劑毒害，操作簡單、便捷；MPE真空平行濃縮儀采用數(shù)字型的真空控制系統(tǒng)，能精確、實(shí)時(shí)地檢測(cè)真空度，避免樣液中目標(biāo)物在過低真空度下?lián)p失，同時(shí)采用水浴加熱和平穩(wěn)的圓周震蕩模式，保證樣品的平行性和可靠性。Fotector Plus 高通量全自動(dòng)固相萃取儀在對(duì)金銀花中多農(nóng)殘進(jìn)行固相萃取凈化時(shí)，使用高精度注射器和十二通閥切換等動(dòng)作，實(shí)現(xiàn)了活化、上樣、淋洗、洗脫整個(gè)固相萃取過程的全自動(dòng)化，6通道同時(shí)運(yùn)行，8種溶劑可選，3種排廢可選，還帶有自動(dòng)清洗樣品瓶的功能來防止目標(biāo)化合物在瓶壁上的殘留，實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化過程的同時(shí)保證了回收率，真正實(shí)現(xiàn)中藥樣品的大批量高效快速的前處理。
(責(zé)任編輯：金利儀器lyh)
