枸杞，又稱枸杞子、紅耳墜，是茄科小灌木枸杞的成熟子實(shí)。枸杞子藥食同源的歷史悠久，是馳名中外的名貴中藥材，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就被列為上品，稱其為“久服輕身不老、耐寒暑”；有延衰抗老的功效，又名“卻老子”。枸杞子中含有多種氨基酸，并含有甜菜堿、玉蜀黍黃素、酸漿果紅素等特殊營(yíng)養(yǎng)成分，使其具有非常好的保健功效。隨著大家對(duì)枸杞營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的認(rèn)識(shí)，養(yǎng)生群體越來(lái)越大，對(duì)枸杞的需求日漸增多，枸杞中的農(nóng)藥殘留也越來(lái)越受到大家的關(guān)注。

 

       本文依據(jù)2020版《中國(guó)藥典》2341通則農(nóng)藥殘留量測(cè)定法新增第五法《藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測(cè)定法》中的快速樣品處理法（QuEChERS），建立了枸杞中33種禁用農(nóng)藥及其單體殘留量的測(cè)定方法，保證了枸杞食用的安全性。

 

       枸杞試樣用1%的冰醋酸水溶液進(jìn)行浸泡使其充分浸濕，再用乙腈進(jìn)行提取，以無(wú)水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠、石墨化碳黑的混合粉末進(jìn)行分散式固相萃取凈化，最后用AutoEVA-20Plus全自動(dòng)平行濃縮儀對(duì)提取液進(jìn)行濃縮。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，33種禁用農(nóng)藥在20-200ppb內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2>0.990）。除了殺蟲脒和氟蟲腈砜之外，其他化合物的回收率均在70-120%之間，RSD在15%以內(nèi)。該方法簡(jiǎn)單、快速、高效，且準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥多殘留的檢測(cè)要求，可用于枸杞中多農(nóng)殘的快速篩查和測(cè)定。

 

       劃重點(diǎn)

       01儀器、試劑

 

       1儀器

       Raykol AutoEVA-20Plus全自動(dòng)平行濃縮儀

       Agilent 1290+6470高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀

       Agilent 8890+7000D氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀

       渦旋儀

       離心機(jī)

       2試劑

       乙腈（HPLC）、冰醋酸（AR）、超純水

       RayCureTM QuEChERS提取鹽包（6g無(wú)水硫酸鎂+1.5g無(wú)水醋酸鈉）

       RayCureTM QuEChERS分散式固相萃取凈化管

       陶瓷均質(zhì)子

       GC-MS/MS法33種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：0.2/0.4/1.0 μg/mL

       LC-MS/MS法30種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：0.2/0.4/1.0 μg/mL

       GC-MS/MS法內(nèi)標(biāo)使用液：磷酸三苯酯 0.1 μg/mL

       劃重點(diǎn)

       02樣品前處理

       1  準(zhǔn)確稱取枸杞試樣3 g，加入15mL 1%冰醋酸溶液，渦旋混勻并震蕩2 min，靜置30 min

       2  準(zhǔn)確加入乙腈15 mL，渦旋混勻并震蕩5 min

       3  加入RayCureTM提取鹽包和一顆陶瓷均質(zhì)子，立即搖散，震蕩1 min后置于冰水浴中10 min

       4  4000 r/min離心5 min，取上清液9 mL置于凈化管中，渦旋使充分混勻，并震蕩5 min使凈化完全

       5  放冷的樣液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙腈多次潤(rùn)洗濃縮杯并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最終用乙腈定容至刻度。

       6  將凈化管4000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確吸取上清液5 mL轉(zhuǎn)移至20 mL玻璃試管中

       7  使用睿科AutoEVA-20Plus全自動(dòng)平行濃縮儀氮吹至約0.4mL后取出，加乙腈稀釋定容至1 mL

 

       劃重點(diǎn)

       03檢測(cè)條件

       氣質(zhì)聯(lián)用色譜圖

       液質(zhì)聯(lián)用色譜圖

 

       劃重點(diǎn)

       04樣品測(cè)試

       提取液凈化

 

       枸杞基質(zhì)較為復(fù)雜，含有大量的糖類、蛋白質(zhì)和色素，所以共萃取物較多。

       一方面基質(zhì)殘留會(huì)使得目標(biāo)化合物的響應(yīng)被抑制或者增強(qiáng)，而農(nóng)藥是容易受到基質(zhì)影響的分析物；

       另一方面雜質(zhì)會(huì)在色譜柱中積聚，也會(huì)縮短色譜柱的壽命。

       本實(shí)驗(yàn)采用RayCure分散式固相萃取凈化管對(duì)提取液進(jìn)行凈化，提高色譜柱的壽命。該凈化柱的填料為復(fù)合填料，由無(wú)水硫酸鎂、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠、石墨化碳黑混合。其中，無(wú)水MgSO4起到吸收水分的作用，以保證上氣質(zhì)前樣品不含水分；C18可以去除樣品基質(zhì)中的脂肪和脂類等非極性干擾物；PSA可以去除糖類、脂肪酸、有機(jī)酸和酚類等干擾物質(zhì)；GCB可以去除色素和甾醇。提取液為黃色，經(jīng)過(guò)化后提取液幾乎為無(wú)色透明的溶液，說(shuō)明該枸杞提取液被充分凈化。

 

       在枸杞樣品中添加濃度為40 μg/kg的33種農(nóng)藥（GC-MS/MS）和20 μg/kg的30種農(nóng)藥（LC-MS/MS）進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證

 

       劃重點(diǎn)

       05總結(jié)

       樣品在加入提取鹽包后要立即搖散，否則容易結(jié)塊。使用陶瓷均質(zhì)子可以防止萃取鹽結(jié)塊，并能夠均勻地分散樣品，提高萃取效率，降低人力成本。

       加入提取鹽包后會(huì)放出大量的熱，所以振蕩后需盡快放入冰水浴中冷卻，或者用預(yù)冷的乙腈，防止對(duì)熱不穩(wěn)定化合物造成影響。

       在氮吹濃縮過(guò)程中，溫度不能超過(guò)40°C，氮?dú)鈮毫Σ荒苓^(guò)大，濃縮時(shí)注意不能吹干，否則將導(dǎo)致部分化合物損失。

 

       劃重點(diǎn)

       06解決方案優(yōu)勢(shì)

 

       本解決方案高效，提取和凈化效果優(yōu)異。AutoEVA 20Plus全自動(dòng)平行濃縮儀可以實(shí)現(xiàn)30個(gè)樣品同時(shí)濃縮，極大的提高了濃縮效率，并且儀器可實(shí)現(xiàn)針隨液面的高度下降，加快濃縮速度，節(jié)約氮?dú)獬杀�；人性化的可視化窗口設(shè)計(jì)可以看到樣品濃縮剩余體積，避免吹干。RayCureTM QuEChERS提取鹽包和凈化管采用進(jìn)口高品質(zhì)填料，嚴(yán)格按照藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行等量封裝，即拿即用，提取和凈化效果好，可以節(jié)約寶貴的人力資源和時(shí)間成本。