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高效且穩(wěn)定的SAXS研究

時間:2021-11-19 10:22來源:金利儀器 作者:金利儀器 點擊:
用線準直測量低濃度且易受輻射影響的生物樣品的小角X-射線散射 (SAXS) ,可以確保短的測量時間,并且得到滿足分析低分辨率的3D結構的高超數據質量。 生物樣品的SAXS SAXS 可以為生物樣品,如蛋白質、RNA、DNA及其復合物等在近乎自然狀態(tài)的溶液條件下提供非常
  

用線準直測量低濃度且易受輻射影響的生物樣品的小角X-射線散射 (SAXS) ,可以確保短的測量時間,并且得到滿足分析低分辨率的3D結構的高超數據質量。

 
生物樣品的SAXS
 
SAXS 可以為生物樣品,如蛋白質、RNA、DNA及其復合物等在近乎自然狀態(tài)的溶液條件下提供非常有價值的結構信息。但是,得到生物材料的高質量SAXS數據是非常復雜的,這是由于低樣品濃度使得散射曲線信噪比低,并且樣品穩(wěn)定性低。
 
線準直提供了克服這些挑戰(zhàn)的獨特優(yōu)勢:
 
相比較于點準直,提高了信噪比
 
良好的樣品穩(wěn)定性(沒有輻射損害所致的樣品變性)
 
高分辨率(例如,更小的散射矢量)及高通量以確保測量時間短
 
為了數據解析和結構研究,使用標準程序對線模糊化的SAXS數據進行評估。
 
實驗和結果
 
在這個研究中,將實驗室SAXS儀器線準直(封閉靶SAXSpace系統(tǒng))與點準直(旋轉陽極靶系統(tǒng))測量的lysozyme蛋白溶液(5 mg/ml)的散射曲線進行比較。兩個實驗的曝光時間和qmin是一樣的。
 
線準直測得的數據消模糊后的1D散射曲線和對距離分布函數p(r)與點準直得到的完全相符(圖1)。
 
使用GIFT1程序中IFT運算法則。
 
消模糊后的數據使用DAMMIF2程序,進行低分辨率模型的重建。如圖2所示,晶體結構(PDB132I)顯然與低分辨率的輪廓相符合。
 
更進一步的SAXS數據在100 kDa 人類核轉運受體transportin-1蛋白濃度為8 mg/ml下記錄。如觀察到的lysozyme,DAMMIF程序由線準直下測得的散射數據得到的低分辨率模型與晶體結構(PDB 4FDD)完全一致。這表明,使用線準直的得到的SAXS數據很好地適合于研究溶液中的生物樣品。
 
 
 
(責任編輯:金利儀器lyh)
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